Molekularbiologische Untersuchungen - PCR

Sinn und Zweck der PCR

Untersuchungsmethoden

Die PCR wurde das erste Mal 1985 von Kary Mullis durchgeführt. Seit damals haben sich viele unterschiedliche Methoden entwickelt.
Konventionelle PCR:
Dies ist vereinfacht gesagt die Urform der PCR, so wie sie Mullis auch durchgeführt hat. Dabei wird ein PCR Produkt nach der enzymatischen Vermehrung auf ein Agarosegel aufgetragen. Ist am Agarosegel ein spezifisches DNA Fragment sichtbar, dann ist das Ergebnis positiv.
Real Time PCR:
Ist eine Weiterentwicklung der konventionellen PCR. Dabei wird während der PCR schon gemessen ob es zu einer Vermehrung von DNA im Reaktionsgefäß kommt. Die Detektion läuft also in Echtzeit (engl. realtime) ab. Ein Vorteil ist somit, dass die Untersuchung kürzer dauert, weil ich nach der PCR das Produkt nicht noch auf dem Agarosegel detektieren muss. Ein weiterer Vorteil ist, dass ich mit dieser Methode auch quantitative Untersuchungen machen kann. Das heißt ich kann am Ende der PCR Rückrechnen wie viel DNA am Anfang in der Probe war und kann somit eine Berechnung der Anzahl an z.B. Krankheitserregern in einer Probe machen. Dies ist bei einigen Krankheitserregern von Bedeutung (z.B. PCV2), weil eine geringe Anzahl der Erreger keine klinische Bedeutung hat, und damit eine quantitative Analyse für die Befundinterpretation von Bedeutung ist.
RT PCR:
Viele Viren beinhalten keine DNA als Erbsubstanz, sondern RNA (z.B. PRRSV, HIV, BTV, BVD). Damit man diese Krankheitserreger mit einer PCR detektieren kann muss man die RNA zuerst in DNA „umschreiben“. Da dieser Schritt eine Umkehrung der molekularen Vorgänge in den Zellen ist, wo normalerweise die DNA in RNA umgeschrieben wird, bezeichnet man diese Methode als „Reverse Transkription“.
Die so hergestellte DNA kann dann wieder in einer normalen PCR vervielfältigt und detektiert werden. Das kann sowohl in einer konventionellen als auch einer real time PCR passieren.
Weitere Methoden:
Die Anzahl an verschiedenen PCR-Methoden nimmt von Jahr zu Jahr zu. Insgesamt ist die PCR in der Zwischenzeit die wichtigste Methode in der naturwissenschaftlichen Forschung. In 90 % aller Publikationen im „Life-Science“ Bereich findet sich eine PCR Methode. In Zukunft wird auch in der klinischen Diagnostik die PCR mehr und mehr die klassischen Methoden (Serologie, Kultur, etc.) ersetzen.

Hinweise zum Probenversand

An dem ILV, Veterinärmedizinische Untersuchungen durchgeführte Untersuchungen, Untersuchungstarife tabellarisch